Toxin腸毒素的用途——作為超抗原

　　原理：葡萄球菌腸毒素屬于超抗原，能夠非特異性激活T細胞增殖并釋放過量細胞因子，可用于抗腫瘤治療。T細胞活化通過暴露于特定抗原（例如Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB)）來測定。SEB是一種細菌毒素，能夠與抗原呈遞細胞(APC)和TCR上的MHCII類分子結(jié)合，誘導(dǎo)促炎細胞因子的釋放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。

　　應(yīng)用舉例：誘導(dǎo)活化T細胞

　　一、將PBMCs（120 K/孔）與Nuclight綠色試劑標記的Ramos細胞（40/孔）進行共培養(yǎng)。使用CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE抗體或Toxin葡萄球菌腸毒素B(SEB)誘導(dǎo)活化。在60 h時，使用T細胞活化分析試劑盒、T細胞介導(dǎo)的細胞殺傷分析試劑盒和T細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)分析10µL樣本。

　　每種活化因子會導(dǎo)致不同的CD3+T細胞蛋白表達和殺傷特征：

　　1.CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的T細胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對應(yīng)于最大的活化標志物表達百分比。該結(jié)果與高水平的細胞耗竭標志物呈現(xiàn)相關(guān)性。

　　2.與Dynabead和SEB相比，CD3×CD19 BiTE抗體介導(dǎo)的靶細胞死亡增量最多，活化和耗竭水平顯著降低。這說明BiTE介導(dǎo)的免疫細胞殺傷時間可能持續(xù)的較長。

　　3.SEB刺激，即使在低濃度下，也可使T細胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率，導(dǎo)致高水平的T細胞耗竭。
 

　　二、使用來自T細胞活化分析試劑盒、T細胞介導(dǎo)的細胞殺傷分析試劑盒和T細胞耗竭分析試劑盒的Qbeads測定Nuclight綠色標記的Ramos和PBMC（3:1比例）共培養(yǎng)時細胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個試劑盒中均檢測了IFN?和TNFa的濃度，以便將所有試劑盒的測定結(jié)果取平均值。

　　各個活化因子對細胞因子分泌和對表面蛋白表達的影響相當：

　　1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi)，CD3/CD28 Dynabead誘導(dǎo)的細胞因子釋放呈濃度依賴性增加。

　　2.與微球或SEB相比，CD3×CD19 BiTE刺激后的細胞因子釋放始終較低（最高刺激濃度下的顆粒酶B濃度除外）。該結(jié)果表明，在降低毒性風險的情況下（例如細胞因子釋放綜合征），可以實現(xiàn)高水平的細胞殺傷。

　　3.SEB可誘導(dǎo)高水平的細胞因子釋放（即使在低濃度下）。
 

　　三、將PBMCs（25 K/孔）與貼壁AU565細胞（5 K/孔）進行共培養(yǎng)。使用SEB誘導(dǎo)T細胞活化。在60 h時，使用T細胞活化分析試劑盒、T細胞介導(dǎo)的細胞殺傷和T細胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合iQue®3系統(tǒng)提取靶細胞和效應(yīng)細胞，進行終點分析。

　　SEB活化誘導(dǎo)靶細胞殺傷呈濃度依賴性增加，伴隨CD3+T細胞上活化（CD69、CD25和HLA-DR）和耗竭（PD-1、LAG-3和TIM-3）標志物的高表達（在所有使用的SEB濃度中均是如此）。
 

　　其他應(yīng)用：抗體制備、毒素檢驗、多種免疫和偶聯(lián)試驗、藥物研發(fā)等。