RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無色水相和粉紅色有機(jī)相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專一性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣。
1、樣品處理：
?、僦参锝M織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
②動(dòng)物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
?、圪N壁細(xì)胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞，每106細(xì)胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。
?、芗?xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。
⑤血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細(xì)胞，可加入2倍體積紅細(xì)胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。
2、將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3、向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘。
4、2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉(zhuǎn)移到新管中，不要吸到沉淀。
5、吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8℃12,000rpm離心2min，棄廢液。
6、第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2-8℃12000rpm離心2min，棄廢液。
7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇)，2-8℃12,000rpm離心2min，棄廢液。
8、向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃12,000rpm離心2min，棄廢液。
9、12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
10、將吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
